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  • 蛋白纯化方法之离子交换技术

    离子交换色谱是蛋白纯化技术中常用的一种纯化方法,其原理是指 被分离物质所带的电荷可与离子交换剂所带的相反电荷结合,这种 带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的,在改变pH 或者用逐 渐增加离子强度的缓冲液洗脱时,离子交换剂上结合的物质可与洗 脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不 同,其与离子交换剂的结合能力也不同,所以被洗脱到溶液中的顺 序也不同,从而被分离出来。

    16 2019-09-20
  • 蛋白纯化方法之凝胶过滤色谱

    凝胶过滤色谱蛋白纯化法,又称为空间排阻色谱,分子筛等。其原理是应用蛋白质分子量或分子形状的差异来分离。当样品从色谱柱的顶端向下运动时,大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒从而被迅速洗脱;而较小的蛋白质分子能够进入凝胶颗粒中,且进入凝胶的蛋白在凝胶中保留时间也不同,分子量越大,流出时间就越早,最终分离分子大小不同的蛋白质。
    通常,多数凝胶基质是化学交联的聚合物分子制备的,交联程度决定凝胶颗粒的孔径。常用的色谱基质有:葡聚糖凝胶(Sephadex)、琼脂糖凝胶(Sepharose)、聚丙烯酰氨凝胶(Bio-Gel P)等。高度交联的基质可用来分离蛋白质和其他分子量更小的分子,或是除去低分子量缓冲液成分和盐,而较大孔径的凝胶可用于蛋白质分子之间的分离。选用合适孔径的凝胶很大程度取决于目标蛋白的分子量和杂蛋白的分子量。

    16 2019-09-20

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